产品简介

本产品是专为两步法RT-PCR 第一步cDNA第一链合成研制的预混液，浓度为5X，包含金牌逆转录酶Goldenstar^TM RT6、dNTPs、Randomer、Oligo(dT)₁₇以及最适的反应缓冲液等。

产品中的Goldenstar^TM RT6逆转录酶由改造的莫洛尼式鼠白血病逆转录酶（MMLV-RT）经体外大肠杆菌重组表达而来。野生型M-MLV RT在分子生物实验中有两个明显的缺点：(1)常有RNase H活性。它会降解RNA模板及中断cDNA链的合成；(2)热稳定性差。RNA以各种复杂的多级结构存在，提高逆转录反应的温度，破坏其复杂结构的稳定性有利于逆转录的顺利进行，但同时也使酶的活性大大降低。GoldenstarTM RT6逆转录酶解决了，上述两个问题。通过删除M-MLV RT的RNase H活性，能有效减少RNA模板的降解，使其聚合酶活性和持续性大大增强；其后通过随机突变筛选出热稳定性强的逆转录突变体，使其反应温度提高至50°C,有利于含复杂结构RNA的逆转录进行。

本产品提供的gDNA Remover可彻底去除RNA模板中残留的基因组DNA，qPCR结果更加可靠，并可简化qPCR引物设计，无需跨内含子设计引物。

产品应用

本产品合成的第-链cDNA主要用于实时荧光定量PCR扩增反应。

产品特点

1.使用方便，只需加模板和水即可进行逆转录反应。

2.反应快速，逆转录反应只需15min即可完成。

3.RNase H活性缺失，产物长，产量高。

4.热稳定性强，对于复杂结构RNA更易成功。

5.快速去除基因组污染。

保存条件

-25- -15°C保存，保质期1年。

注意事项

1.实验中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染。操作人员需佩戴口罩和一-次性手套,实验中经常更换手套,使用专门的仪器和耗材。

2.为保证逆转录成功，请使用高质量的RNA。推荐使用琼脂糖凝胶电泳的方法检测RNA完整度。

3.GoldenstarTM RT6 cDNA Synthesis Mix为5x预混液,在-20*C不会冻结。使用前可颠倒数次混匀并短暂离心。

4.本试剂盒合成的第一链cDNA用于后续PCR扩增时，其使用量不应超过PCR总体积的10%。

5.逆转录产物用于扩增反应时,其使用量不应超过总反应体积的10%。

本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用,不可用于临床诊断或治疗。

TSK314S-Goldenstar® RT6 cDNA Synthesis Mix说明书V1.1.2.pdf