Golden Gate 组装用户须知：BsaI-HFv2（NEB #R3733）针对 Golden Gate 组装* 进行了优化。BsaI-HFv2 同样适用于任何需要使用 BsaI 切割 DNA 的实验流程。任何需要在 5′-GGTCTC(N1)/(N5)-3′ 识别序列处进行酶切的推荐用酶。

 

*Golden Gate 组装过程中对 DNA 酶切的要求比传统 DNA 克隆更为严苛。用于 Golden Gate 组装的限制性内切酶必须可以在酶的非最适缓冲液中反应良好，并在动态的酶切/重新连接反应中，在内切酶与连接酶竞争性结合底物的前提下，在更高的反应温度下，延长酶切时间，仍然拥有活性。大量测试表明，在具有挑战性的 Golden Gate 组装实验（限制性内切酶酶切效率和保真性至关重要）中，相较于 BsaI（NEB #R0535）和 BsaI-HF（NEB #R3535），BsaI-HFv2 的性能更优越。 高保真（HF®）限制性内切酶具有与天然酶相同的特异性，但经过改造后显著降低星号活性，并使用统一的缓冲液（rCutSmart™ 缓冲液）。所有 HF 限制性内切酶均随附 6X 紫色凝胶上样染料。经过改造的内切酶与天然内切酶相比较，虽然价格相同，但性能和性价比更高：

为提高性能进行基因工程改造 用于 Golden Gate 组装；在常用于此用途的 T4 DNA 连接酶缓冲液中保持高活性水平 IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列，并在识别序列之外进行切割 在 rCutSmart 缓冲液中具有 100% 活性 符合省时酶（Time-Saver™）标准，可在 5-15 分钟内完成酶切 降低星号活性 NEB 开发了便捷的 Golden Gate 组装试剂盒（使用 BsmBI-v2 和 BsaI-HFv2）。 限制性内切酶酶切位点：GGTCTC(1/5) “我真的很喜欢 BsaI-HFv2。我们再次获得了惊人的 GGA 结果，背景极低。”

- 美国北卡罗来纳州戴维森学院首席研究员 M.C 展开收起