产品简介

Trelief ® Seamless Cloning Kit利用同源重组的原理，可将1~5个片段定向重组至载体中，可有效克隆50 bp~20 kb的片段到线性化载体中。将载体通过酶切或PCR线性化，并在扩增片段正、反向PCR引物5’端引入15~25 nt同源序列，使得扩增产物之间以及扩增产物与线性化载体之间各有一段同源序列，各片段和线性化载体在重组酶的作用下，仅需50 ℃反应15~45 min即可进行转化，克隆阳性率可达95%以上。其工作原理如下：

 

产品组成

 

*   线性化质粒，抗性为Amp，含M13F/R序列；

**  阳性对照片段，大小为1,000 bp。

产品应用

无缝克隆

定点突变

高通量克隆

产品特点

快速：重组反应仅需要15~45 min；

多片段克隆：线性化载体可有效组装1~5个片段；

高效：阳性率可达95%以上；

无缝：不引入额外的序列。

注意事项

1.载体需要充分酶切处理，未切开的载体会影响后续的阳性克隆鉴定；

2.一般情况下，多片段重组效率低于单片段重组，为保证重组效率，建议切胶纯化后再进行重组反应；

3.单片段和线性化载体重组时，摩尔比常为2:1；

4.多片段和线性化载体重组时，各个片段的摩尔数宜保持一致；

5.配制重组体系时，应先加线性化载体、目的片段和水，最后加2×Seamless Cloning Mix，体系配制最好在冰上，配制完后应立即用于重组反应。

保存条件

-25~-15 ℃保存，保质期1年，低温运输。

本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用，不可用于临床诊断或治疗