产品简介

根癌农杆菌L BA4404染色体背景为Ach5，核基因上含有筛选标签——利福平抗性基因rif；该菌株携带的pAL4404是一种无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒，质粒上含有的vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移;同时pAL 4404质粒含有的strep筛选标签，赋予LBA4404菌株链霉素抗性；通常用于番茄、烟草等植物的转基因操作。本制品经优化的感受态制备工艺制备而成，使用pCAMBIA2301质粒DNA检测，转化效率可达1x104 cfu/μg。

使用方法

1.将-83°~-78C保存的农杆菌感受态放置于室温或指尖捏住片刻，待其部分融化后插入冰上。

2.加入目的质粒，轻轻混匀依次于冰上静置 5 min、液氮5 min、37 ℃水浴5 min、冰浴5 min。

3.向离心管中加入700 μL不含抗生素的无菌培养基(YEB或LB)，混匀后28 ℃，200 rpm复苏2~3 h。

4.根据实验需要，吸取不同体积的复苏液均匀涂布到含相应抗生素的YEB或L B平板上，将平板倒置放于28 °C培养箱培养2~3天。

注意事项

1.实验过程中轻柔操作。

2.质粒用量通常为0.01~1μg，可通过用量梯度预试验确定合适的质粒用量。

3.质粒不纯或存在乙醇等有机溶剂的污染会影响其转化效率。

4.利福平的浓度控制在20~25 μg/mL之间， 过高的抗生素浓度会影响其生长速率和转化效率。本公司计算感受态转化效率所用的是20 μg/mL rif和50 μg/mL kana的YEB平板。

保存条件

-83~-78 ℃保存6个月。

本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用,不可用于临床诊断或治疗。