Solarbio P9120 鸡脾脏淋巴细胞分离液试剂盒
- 销售价:
- ¥640.00
- 市场价:
-
¥800.00 - 编号:
- 1216162559542
- 货号:
- P9120-200ml/Kit
-
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- 产品规格:
- 200ml
- 数量:
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商品介绍
本品用于分离鸡脾脏淋巴细胞。本品易感染细菌,需无菌条件操作。无菌条件下操作,启封后置常温保存。如 4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。
规格:4 ×200mL/kit, 保存:室温避光储存,有效期至少2年。启封后置4℃保存,有效期一周。
一、 脾脏组织单细胞悬液的制备方法, 注:A.全过程及所需试剂要求无菌环境。
B.本试剂盒中不包含胶原酶,若采用酶消化法制备单细胞悬液,请用户根据各实验室要求另购不同类型胶原酶。
1. 剪碎法:将组织块放入平皿后,加入少量F液及20%胎牛血清;用眼科剪将组织剪至匀浆状,加入5mL F液及20%胎牛血清;用吸管吸取组织匀浆,用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内;离心沉淀1500转/分×3 min,再用细胞清洗液清洗3次,每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片,以200目不锈钢滤网(另购)过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10⁷个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×10⁸~1×10⁹个/mL的单细胞悬液备用。
2. 匀浆器法:用眼科剪将组织剪成小块;放入70mL组织研磨器内,加入2mLF液及20%胎牛血清;缓慢转动研棒,研磨至匀浆;用5mLF液及20%胎牛血清冲洗研器;收集细胞悬液,经200目不锈钢滤网(另购)过滤;离心沉淀800rpm×2min ,再用细胞清洗液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10⁷个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×10⁸~1×10⁹个/mL的单细胞悬液备用。
3. 酶消化法:
A.用F液将胶原酶稀释,终浓度为400 U/mL,至于冰浴备用。
B.取一适当大小培养皿进行操作:用镊子夹碎动物脾脏,加入稀释后的胶原酶,37℃消化20分钟。
C.以100或200目不锈钢滤网(另购)过滤,离心沉淀800prm×2min ,再用细胞清洗液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10⁷个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×10⁸~1×10⁹个/mL的单细胞悬液备用。
细胞计数方法: 细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。既可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。
计数与计算过程
1)在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2)用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止。
3)置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。
4)按下式计数细胞悬液的密度: 细胞密度=(4个大格细胞总数/4)×10⁴个/mL×稀释倍数, 公式中乘以10⁴ 因为计数板中每一个大格的体积为: 1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm³而 1mL=1000mm³, 细胞计数要点: A.进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于10⁴个/mL,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中;显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数
备注:以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。
规格:4 ×200mL/kit, 保存:室温避光储存,有效期至少2年。启封后置4℃保存,有效期一周。
一、 脾脏组织单细胞悬液的制备方法, 注:A.全过程及所需试剂要求无菌环境。
B.本试剂盒中不包含胶原酶,若采用酶消化法制备单细胞悬液,请用户根据各实验室要求另购不同类型胶原酶。
1. 剪碎法:将组织块放入平皿后,加入少量F液及20%胎牛血清;用眼科剪将组织剪至匀浆状,加入5mL F液及20%胎牛血清;用吸管吸取组织匀浆,用100目不锈钢滤网(另购)过滤到试管内;离心沉淀1500转/分×3 min,再用细胞清洗液清洗3次,每次以500rpm短时低速离心除去细胞碎片,以200目不锈钢滤网(另购)过滤去细胞团块。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10⁷个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×10⁸~1×10⁹个/mL的单细胞悬液备用。
2. 匀浆器法:用眼科剪将组织剪成小块;放入70mL组织研磨器内,加入2mLF液及20%胎牛血清;缓慢转动研棒,研磨至匀浆;用5mLF液及20%胎牛血清冲洗研器;收集细胞悬液,经200目不锈钢滤网(另购)过滤;离心沉淀800rpm×2min ,再用细胞清洗液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10⁷个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×10⁸~1×10⁹个/mL的单细胞悬液备用。
3. 酶消化法:
A.用F液将胶原酶稀释,终浓度为400 U/mL,至于冰浴备用。
B.取一适当大小培养皿进行操作:用镊子夹碎动物脾脏,加入稀释后的胶原酶,37℃消化20分钟。
C.以100或200目不锈钢滤网(另购)过滤,离心沉淀800prm×2min ,再用细胞清洗液洗3次,离心沉淀。作细胞计数并调整细胞浓度为(2~5)×10⁷个/mL。常温下放置, 待测细胞的活力。分离前用20%胎牛血清或样本稀释液悬起细胞浓度为2×10⁸~1×10⁹个/mL的单细胞悬液备用。
细胞计数方法: 细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板(血球计数板)进行。既可用于分离(散)细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何,均须制备分散的细胞悬液。
计数与计算过程
1)在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2)用玻璃虹吸管吸取细胞,让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液,至盖玻片被液体充满为止。
3)置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者,对于细胞团按单个细胞计数。
4)按下式计数细胞悬液的密度: 细胞密度=(4个大格细胞总数/4)×10⁴个/mL×稀释倍数, 公式中乘以10⁴ 因为计数板中每一个大格的体积为: 1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm³而 1mL=1000mm³, 细胞计数要点: A.进行细胞计数时,要求悬液中细胞数目不低于10⁴个/mL,如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中;显微镜下计数时,遇到2个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算。如果细胞团>10%,说明细胞分散不充分; 或细胞数
备注:以上数据均来自公开文献, Solarbio暂未进行独立验证, 仅供参考。
商品参数
商品介绍 | |
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单位 | 盒 |
品牌 | Solarbio |
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