Calcein, AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Calcein，从而被滞留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如 BCECF, AM和CFDA）相比，Calcein, AM的细胞毒性很低。Calcein的激发和发射波长分别为 490 nm和515 nm。       Calcein, AM仅对活细胞染色。作为核染色染料的PI 不能穿过活细胞的细胞膜，它穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的 DNA双螺旋从而产生红色荧光（激发：535 nm，发射：617 nm），因此 PI 仅对死细胞染色。由于 Calcein和PI-DNA 都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545 nm激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein, AM和PI 经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。        由于不同细胞系的最佳染色条件不同，我们建议个别确定Calcein, AM 和PI的合适浓度。   操作说明：      （1）用DMSO 制备1 mM 的Calcein, AM溶液，并用PBS 将其稀释制成1～50μM的Calcein, AM溶液①。      （2）将1/10 细胞培养基体积的Calcein, AM溶液加入到细胞培养基中②。      （3）在37℃培养细胞15～30分钟。       （4）用PBS 或适当的缓冲液洗涤细胞两次。       （5）用490 nm激发波长，515 nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。  注意：,如果Calcein, AM很难进入细胞，可以使用表面活性剂，如Pluronic F127 。        也可以用1/10 浓度的Calcein, AM溶液代替培养基。

C8950-1mg.pdf

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