商品详情：Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒产品编号产品名称规格BL107AAnnexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（增强型）50 TBL107BAnnexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒（增强型）100 T 产品简介：在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素FITC标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。产品组分：产品编号产品名称BL107ABL107B1AnnexinV-FITC250uL500uL2Propidium Iodide250uL500uL3Binding Buffer25 mL50mL 使用方法:1、悬浮细胞离心（2000rpm 离心5min）收集；贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集（注：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性）；2、用PBS洗涤细胞二次（2000rpm离心5min）收集1~5×105细胞；3、加入500uL的Binding Buffer悬浮细胞；4、加入5uL Annexin V-FITC 混匀后，加入5uL Propidium Iodide，混匀； 5、室温、避光、反应5～15min；6、请在1h 内，进行下述荧光显微镜或流式细胞仪的观察和检测。 A．荧光显微镜观察1) 滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上，并用盖玻片盖上细胞；2) 对于贴壁细胞来说，也可直接用盖玻片来培养细胞并诱导细胞凋亡；1、将细胞于盖玻片上生长，用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡，并设立阴性对照组；2、用PBS洗涤细胞两次；3、在500uL的Binding Buffer 中加入5uL Annexin V-FITC，5uL Propidium Iodide，混匀；4、将上述溶液滴加于盖玻片表面，使盖玻片表面均匀覆盖；5、避光、室温反应5min。6、将盖玻片倒置于载玻片上，于荧光显微镜下、双色滤光片（FITC和罗丹明）观察。Annexin V-FITC 荧光信号呈绿色，PI 荧光信号呈红色。 B. 流式细胞仪分析1) 用流式细胞仪检测，激发波长Ex=488 nm；发射波长Em=530 nm。2) Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道（FL1）检测；PI红色荧光（流式Ex=488nm,Em≥630nm）通过FL2或FL3通道检测，建议使用FL3。3) 荧光补偿调节：使用经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。 C．实验范例用凋亡诱导剂诱导 P388 细胞凋亡，在 37℃，5%CO2 培养箱培养4～6h 后，参照说明书的操作方法进行检测， 经流式细胞仪检测结果见下图。 对照               诱导剂处理注意事项：1、微量试剂取用前请离心收集。2、Annexin V-FITC，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。3、Propidium Iodide（PI）有毒，操作时要戴手套。4、本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低1×105，不推荐用于检测组织样本。5、推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。6、细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。7、因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 保存条件：2-8℃避光保存，一年有效。