测定意义：AsA又称维生素C。AsA是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂，AsA在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用，也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。 测定原理：抗坏血酸氧化酶（AAO）催化AsA氧化生成DHA，通过测定AsA的氧化速率，即可计算出AsA含量。 自备仪器和用品：研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、1 mL石英比色皿、可调式移液器和蒸馏水。 操作步骤：一、样品中AsA提取：,按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂,一）进行冰浴匀浆，10000rpm 4℃离心20min，取上清液待测。,二、AsA测定操作： 1.分光光度计预热30 min，调节波长到265 nm，蒸馏水调零。 2.试剂二在25℃水浴锅中预热30 min以上。 3.标准管：依次在比色皿中加入100μL标准液、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀，在265nm测定，记录30s和150s的吸光值A1和A2，△A标准管= A1-A2。 4.测定管：依次在比色皿中加入100μL上清液、800μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀，在265nm测定，记录30s和150s的吸光值A3和A4，△A测定管= A3-A4。 三、AsA含量计算: a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 （1）按蛋白浓度计算 AsA (μmol/mg prot) =[C标准液×（△A测定管÷△A标准管×V标准）÷（Cpr ×V样）=0.1 ×△A测定管÷△A标准管÷Cpr （2）按样本鲜重计算 AsA (μmol/g ) =[C标准液×（△A测定管÷△A标准管×V标准）÷（W ×V样÷V样总）=0.1 ×△A测定管÷△A标准管÷W,C标准液：100μmol/L；V 标准：标准液体，0.1mL；V样总：上清液总体积，1.0 mL=1 ×10-3 L；,V 样：加入反应体系中上清液体积，0.1mL ；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量（g）。